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大肠杆菌O157：H7 黄曲霉毒素 李斯特菌 沙门氏菌 盐酸克伦特罗（clenbuterol） 氯霉素残留及检测 磺胺类药物 |
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磺胺类药物 一、 概述： 磺胺类药物被广泛用作饲料添加剂来预防动物疾病和提高饲料利用率。用药动物食品中药物的残留会对消费者的健康造成威胁，并且长期用药会产生耐药菌株。磺胺类残留主要是磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺类药物是磺胺的衍生物。 1、发现：1935年发现了一种含有发色团的磺胺类化合物即偶氮磺胺，它显示出具有抗菌活性。因磺胺类药物具有抗菌谱广，性质稳定便于长期保存，价格比较便宜，又有长效、中效、短效等各种制剂的优点。从首次发现起，磺胺类药物就被广泛用于人类和食用动物。因此磺胺类药物在动物食品中残留问题的出现已有近30年时间，并且在近15-20年内磺胺类药物残留超标现象比其他任何兽药残留都严重。磺胺类残留主要是磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺类药物是磺胺的衍生物。 2、 磺胺类药物的化学结构：磺胺都是氨苯磺胺 (简称磺胺，Sulfanilamide,SN ),的衍生物。磺胺的分子中含有一个苯环，一个对位氨基和一个磺酰胺基。各种化学基团来取代磺酰胺基上的氢原子，合成了大量有效的衍生物。以下是常用磺胺类药物的结构式： 3、抑菌机理：磺胺的基本化学结构和细菌“生长物质”对氨苯甲酸很相似，可与对氨苯甲酸竞争二氢叶酸合成酶，妨碍二氢叶酸的形成，最终影响核蛋白的合成，抑制细菌的生长与繁殖。 二、危害及影响 磺胺类作为预防与治疗用药而广泛地用于食用动物中，它们的用药方式可以是加药饲料、水添加剂、丸剂或针剂。磺胺类药物根据其应用情况可分为三类即用于全身感染的磺胺药 (如磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶)、用于肠道感染内服吸收的磺胺类药物和用于局部磺胺药(如磺胺醋酰)。在治疗慢性感染方面的应用已受到限制。 (一) 磺胺类药物对人的副作用 1、过敏反应：在治疗奶牛乳房炎时如未执行弃乳期规定，过敏反应病人中，轻者引起皮肤瘙痒和荨麻症，重者引起血管性水肿，严重的过敏病人甚至出现死亡。 2、泌尿系统损害：磺胺药从肾脏排泄时，尿中浓度较高，可能在肾小管、肾盏、输尿管或膀胱内形成结晶沉淀，因而发生刺激和阻塞现象，出现血尿、疼痛、尿闭等症状。 3、 血液系统的反应：磺胺药能抑制骨髓的白细胞生成，产生白细胞减少症。偶见粒细胞减少症。可致溶血性贫血。 4、 其它：引起头晕、头痛、全身乏力、恶心、呕吐、等消化道症状也较多见。 三、 部分国家检验检疫要求： ● 英、美等国家对磺胺类药物残留的规定不得超过 肉品中允许残留量限制为 100ug/kg 乳品为0-100ug/kg ●欧盟第675/92号令中规定 肉类及牛奶中磺胺的最大残留量总量不得超过100ug/kg 肾脏不得超过600ug/kg 肝脏不得超过300ug/kg 鸡蛋中不得超过200ug/kg ● 我国1994年农业部发布《动物性食品中兽药的最高残留量(试行)》中规定 磺胺类总计在牛、羊/山羊、猪、家禽肝、肾和脂肪中MRL 为0.3mg/kg 牛、羊、猪肌肉中为0.3mg/kg 牛、羊乳中为0.05mg/kg 磺胺二甲嘧啶 (SM)在牛、羊/山羊、猪、家禽肌肉中MRL为0.1mg/kg 肝、肾和脂肪中为0.1mg/kg 牛和羊乳中为0.025mg/kg。 四、磺胺类药物残留的检测方法： (一)传统微生物抑制试验 (MIT) 分析大量样品中抗生素的残留物通常采用MIT法。此方法是建立在活性药物抑制微生物生物能力的基础上，通用的抑制试验是圆盘检验技术。将样品提取液点在接种有试验菌的琼脂上，培养后可测定抗菌药物形成的抑菌圈。抑菌圈表明抗生素的存在，而圈的大小与抗生素的浓度有关，嗜热脂肪芽胞杆菌纸片法 20世纪80-90年代，国际上公认并作为法定检测食品中抗生素的残留的方法首推嗜热脂肪芽胞杆菌纸片法。1997年由Kaufman提出，利用Difco抗生素4号培养基接种嗜热脂肪芽胞杆菌芽胞，把接种培养基6ml倒入各个15mm×100mm的培养皿中(平皿需于7天内使用)纸片直径12.7mm浸渍奶样，放于琼脂中，把平皿于64℃培养2小时或55℃培养4 小时，培养结束，用毫米游标尺测量抑菌圈直径，阳性结果以≥16mm为准，能检出牛奶中青霉素含量0.005U/ml，本法可进行定量测定，1981年由FDA认可，1982年1月1日起生效为法定方法。 (二) 氯化三苯四氮只唑法(TTC) 原理：细菌生物氧化有方式，即加氧、脱氧和脱电子，相反即还原。当乳中加入嗜热链球菌后，如乳中无抗生素，嗜热链球菌就生长繁殖，在新陈代谢过程中进行生物氧化，其中脱出的氢可以和加在乳中的氧化型TTC结合而成为还原型TTC，氧化型TTC是无色的，还原型TTC是红色，所以可使乳变红色。相反，如乳中存在抗生素，嗜热链球菌就不能生长繁殖，没有氢释放，TTC也不能被还原仍为无色，乳汁也无色。 (三) 酶联免疫吸附剂测定(EILSA) 原理：测定的基础是抗原抗体反应，微孔板包被有针对兔IgG(如磺胺二甲基嘧啶抗体)的羊抗体。加入磺胺二甲基嘧啶的抗体，磺胺二甲基嘧啶酶标记物，标准或样品溶液。游离磺胺二甲基嘧啶与磺胺二甲基嘧啶酶标记物竞争磺胺二甲基嘧啶抗体，同时磺胺二甲基嘧啶抗体与羊抗体连接。没有连接的酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶基质(过氧化尿素)和发色剂(四甲基联苯胺)加入到孔中并且孵育。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色由蓝转变为黄色 。在450nm处测量，吸收光强度与样品中的磺胺二甲基嘧啶浓度成反比。 (四) 放射免疫测定法 基本概念和原理：由Bersont Yalow (1959)提出的应用同位素标记技术来检测抗原抗体的高灵敏度方法，称为放射免疫测定法。实际上，RIA测定就是应用放射性物质代替EILSA中的标记酶作为抗体的偶联物，在食品安全快速检测中最常见的同位素是3H和14C。1978年Charm氏在RIA技术的基础上发展了放射免疫受体检测技术(RRA) 此方法将细胞上具有特异性受体点的细菌加到含有3H或14C标记药物的牛奶或组织提取物中，这些加放射标记的药物与样品中所含的药物残留物竞争可利用的细胞受体部位，样品经离心除去上清液，沉淀在β-闪烁液重新悬浮，用液体闪烁计数器来测量其放射性。样品的放射性与判定点比较，判定点的值是采用6 个误差在±15%的平行加标样品的均值。样品的放射强度与样品中残留物的含量成反比。牛奶、血清、鸡蛋、组织中的检测限在低于10-6范围内，CharmⅡ检测现已发展到可检出β-内酰胺类、大环内酯类、四环素类、氯霉素类、氨基糖苷类和磺胺类这六大常见抗生素残留的快速检测。 五、各种检测方法的比较 1、液相色谱和气相色谱法检测需要精密仪器，且操作复杂，亦不得利于大面积推广。 2、酶联免疫吸附法快速、灵敏、可定量、操作简便、无需贵重仪器设备，适用于大批量样品的检测。 |
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